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深度测序
来源:中国生殖健康产业诊断中心(筹) www.szjkzd.org/  发布日期:2011-10-6 12:35:50
文章导读:新一代测序技术(Next Generation Sequencing)也叫深度测序、高通量测序技术,是对传统测序技术的革命性变革,可以一次完成数十万到数百万条DNA分子的序列测定,使得在极短时间内对人类转录组和基因组进行细致研究成为可能。

 

高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变,一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定,体现了其高通量、快速又准确的优越性。

其优越性是由该技术的几个特征决定的:

Sanger测序中,是先将基因组DNA片断化,然后克隆到质粒载体上,再转化大肠杆菌。对于每个测序反应,挑出单克隆,并纯化质粒DNA。每个循环测序反应产生以ddNTP终止的,荧光标记的产物梯度,在测序仪的96384毛细管中进行高分辨率的电泳分离。当不同分子量的荧光标记片断通过检测器时,四通道发射光谱就构成了测序轨迹。在这个过程中,每一条DNA片段需要克隆后转化大肠杆菌,需要挑取单菌落,然后每个单独的大肠杆菌中的插入DNA片段要进行多次测序才能测通。

   而在第二代测序技术中,片断化的基因组DNA两侧连上接头,随后运用不同的步骤来产生几百万个空间固定的PCR克隆阵列(polony)。每个PCR克隆由单个文库片段的多个拷贝组成,并不需要质粒和大肠杆菌的克隆。之后进行引物杂交和酶延伸反应。由于所有的PCR克隆都是系在同一平面上,这些反应就能够大规模平行进行。同样地,每个延伸所掺入的荧光标记的成像检测也能同时进行,来获取测序数据。酶拷问和成像的持续反复构成了相邻的测序阅读片段。

  目前第二代测序技术已经大量应用于各种科学研究。

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